כיצד משתמשים באנזימי הגבלה בעת ביצוע אלקטרופורזה בג'ל?
כיצד משתמשים באנזימי הגבלה בעת ביצוע אלקטרופורזה בג'ל?

וִידֵאוֹ: כיצד משתמשים באנזימי הגבלה בעת ביצוע אלקטרופורזה בג'ל?

וִידֵאוֹ: כיצד משתמשים באנזימי הגבלה בעת ביצוע אלקטרופורזה בג'ל?
וִידֵאוֹ: Restriction Enzymes and Gel Electrophoresis 2024, דֵצֶמבֶּר
Anonim

1 תשובה. כדי לחתוך DNA, RNA, או פלסמיד ב הַגבָּלָה אתרים (כמו EcoRI, BamHI, hindIII ו-BglII) ליצירת שברים גנטיים קטנים יותר הניתנים להפרדה ובכך לאפיין באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל.

באופן דומה אפשר לשאול, מהו תפקידם של אנזימי הגבלה?

א אנזים הגבלה הוא חלבון שמזהה רצף נוקלאוטידים ספציפי וקצר וחותך את ה-DNA רק באותו אתר ספציפי, הידוע בשם הַגבָּלָה אתר או רצף יעד. בחיידקים חיים, אנזימי הגבלה פועלים להגן על התא מפני בקטריופאג'ים ויראליים פולשים.

כמו כן, איך יודעים באיזה אנזים הגבלה להשתמש? בעת בחירת אנזימי הגבלה, אתה רוצה לבחור אנזימים ש:

  1. אגף את התוספת שלך, אך אל תחתוך בתוך התוספת שלך.
  2. נמצאים במיקום הרצוי בפלסמיד הנמען שלך (בדרך כלל באתר השיבוט המרובה (MCS)), אך אין לחתוך במקום אחר בפלסמיד.

מלבד זאת, כיצד משתמשים באנזימי הגבלה במחקר?

במעבדה, אנזימי הגבלה (אוֹ אנדונוקליזות הגבלה ) הם בשימוש לחתוך DNA לשברים קטנים יותר. החתכים נעשים תמיד ברצפי נוקלאוטידים ספציפיים. שונה אנזימי הגבלה לזהות ולחתוך רצפי DNA שונים.

מה תפקידה של אלקטרופורזה בג'ל?

אלקטרופורזה של ג'ל היא טכניקה המשמשת להפרדת שברי DNA לפי גודלם. דגימות DNA נטענות לתוך בארות (חריצים) בקצה אחד של א לְהַגלִיד , וזרם חשמלי מופעל כדי למשוך אותם דרך לְהַגלִיד . שברי DNA טעונים שלילי, ולכן הם נעים לעבר האלקטרודה החיובית.

מוּמלָץ: