מדוע יש צורך לטהר מוצרי PCR לפני ביצוע הרצף?

2024 מְחַבֵּר: Stanley Ellington | [email protected]. שונה לאחרונה: 2023-12-16 00:17

אימות הרצוי מוצר הוא חִיוּנִי , הכולל אישור היעדר לא ספציפי מוצרים ודימר פריימר. לְנַקוֹת למעלה של תערובת התגובה היא גם נחוץ כדי להסיר פריימרים לא משולבים ו-dNTPs שיכולים להפריע לתגובות עוקבות ולהוביל לרצף בלתי קריא.

חוץ מזה, למה יש צורך לטהר מוצרי PCR?

אתה צריך לטהר מוצרי PCR להיפטר מפריימרים, נוקלאוטידים ואנזימים שאינם בשימוש על מנת לייעל את הצלחת הקשירה, שתשמור על רצף מוצר שֶׁל PCR . ל לְטַהֵר ה מוצרי PCR , נעשה שימוש בכרומטוגרפיה של אי הכללת גודל.

אפשר גם לשאול, האם כדאי לטהר מוצרי PCR לפני עיכול אנדונוקליז מוגבל? הרוב של הַגבָּלָה אנזימים פעילים ב PCR חוצצים. עבור יישומי שיבוט, טָהֳרָה שֶׁל מוצרי PCR לפני העיכול הוא נחוץ כדי להסיר את פולימראז ה-DNA התרמופילי הפעיל הקיים ב- PCR תַעֲרוֹבֶת. פולימראזות DNA עשויות לשנות את קצוות ה-DNA המפוצל ולהפחית את תפוקת הקשירה.

אנשים גם שואלים, איך מכינים מוצרי PCR לרצף?

רצף ישיר של מוצרי PCR

1. ודא שהגברת את הפרגמנט הנכון.
2. עליך להסיר את כל הפריימרים של PCR והנוקלאוטידים הלא משולבים.
3. אם הפריימרים של PCR יהיו גם הפריימר לרצף, ודא שהם תואמים לתנאים שלנו.
4. אל תרכז יתר על המידה את המדגם!

האם אתה יכול לרצף תוצר PCR?

ישיר רצף שֶׁל מוצרי PCR . רצף משתמש בלבד אחד פריימר במקום השניים בשימוש PCR . אם אתה כן לא להסיר את שני הפריימרים, אתה לקבל שניים רצפים מוצבים אחד על השני שאינם ניתנים לקריאה. זה בסדר להשתמש ב-a PCR פריימר עבור רצף כל עוד זה מתאים לתנאים שלנו.